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COMPARACIÓN DE DOS MÉTODOS DE RT-PCR PARA LA CUANTIFICACIÓN DE VIREMIA DE VEB EN PACIENTES SOMETIDOS A TRASPLANTE HEMATOPOYÉTICO
Autores:
MARIA LUISA FERNÁNDEZ RUEDA. HOSPTAIL UNIVERSITARIO DE SALAMANCA. SALAMANCA. España
MAGDALENA GONZÁLEZ ÁVILA. HOSPITAL UNIVERSITARIO DE SALAMANCA. SALAMANCA. España
ANA Mª BLÁZQUEZ DE CASTRO. HOSPITAL UNIVERSITARIO DE SALAMANCA. SALAMANCA. España
Mª NIEVES GUTIÉRREZ ZUFIAURRE. HOSPITAL UNIVERSITARIO DE SALAMANCA. SALAMANCA. España
SANTIAGO MUÑOZ CRIADO. HOSPITAL UNIVERSITARIO DE SALAMANCA. SALAMANCA. España
JUAN LUIS MUÑOZ BELLIDO*. HOSPITAL UNIVERSITARIO DE SALAMANCA. SALAMANCA. España
INTRODUCCIÓN. El virus de Epstein-Barr (VEB) se replica en células epiteliales, y establece su fase de latencia en linfocitos. Además de su relación etiológica con la mononucleosis infecciosa y con diferentes tipos de tumores en pacientes inmunocompetentes, tanto la infección primaria como la reactivación se asocian a trastornos linfoproliferativos en inmunodeprimidos. Esta situación se da, en especial, en pacientes receptores de trasplantes de órganos (post-transplant lymphoproliferative disorders, PTLD), sobre todo cuando se asocia a infección primaria por VEB después del trasplante, o a depleción severa de linfocitos T. Para el seguimiento de los PTLD se recomienda la
utilización de pruebas de amplificación de ácidos nucleicos (NAAT) cuantitativas, bien sobre leucocitos, sangre completa, suero o plasma. En el presente estudio se han comparado dos técnicas de RT-PCR para la cuantificación de VEB en plasma en pacientes inmunodeprimidos sometidos a trasplante hematopoyético.
MATERIAL Y MÉTODOS. Se cuantificó la viremia de VEB en 16 muestras de pacientes inmunodeprimidos, sometidos a trasplante hematopoyético, y con riesgo elevado de desarrollar PTLD, mediante dos técnicas de RT-PCR (Affigene EBV Trender, Affigene, Suecia) (método A) y Simplexa EBV (Focus Diagnostics, USA) (método B).
RESULTADOS. La valoración cualitativa de los resultadosaparece en la Tabla 1.
Tabla 1. Cuantificación de viremia por VEB en 16 pacientes con riesgo de PTLD.
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Método |
TOTAL |
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Método A |
+ |
– |
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+ |
7 |
1 |
8 |
|
– |
0 |
8 |
8 |
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TOTAL |
7 |
9 |
16 |
Solamente hubo una discrepancia cualitativa, negativa en el método B y positiva con muy bajo número de copias (444 copias/mL) en el método A. En cinco casos, la carga por el método B fue positiva pero no cuantificable (<900 copias/mL). Estas muestras oscilaron por el método A entre 33 y 5.900 copias/mL (x: 2109 + 2375,6 copias/mL). Las dos muestra cuantificables ofrecieron diferencias de 0,3 y 1 log10 (10.793 (A) vs. 5.697 copias/mL (B) y 18.519 (A) vs. 1.791 (B) copias/mL respectivamente).
DISCUSIÓN. La correlación cualitativa entre métodos es alta, pero la cuantitativa es pobre. La fiabilidad de resultados requiere la inclusión de estándares externos, que deben ser extraídos junto con las muestras clínicas.
Palabras clave: Virus de Epstein Barr; Inmunodeprimidos; RT-PCR;
