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CUANTIFICACIÓN DE LA INVASIÓN EN AGAR DE ENTEROCOCCUS FAECALIS MEDIANTE ANÁLISIS DE IMAGEN
Autores:
Maria Teresa Corcuera*. Unidad de Anatomía Patológica, Hospital Carlos III. Madrid. España
Fernando Gomez-Aguado. Unidad de Anatomía Patológica, Hospital Carlos III. Madrid. España
M Carmen Ramos. Area Microbiología, Facultad de Medicina UCM. Madrid. España
M Luisa Gómez-Lus. Area Microbiología, Facultad de Medicina UCM. Madrid. España
M. José Alonso. Unidad de Anatomía Patológica, Hospital Carlos III. Madrid. España
José Prieto. Area Microbiología, Facultad de Medicina UCM. Madrid. España
INTRODUCCIÓN
La invasión del agar en medios de cultivo sólidos se ha considerado como un potencial factor de virulencia en levaduras. Recientemente se ha observado este mismo fenómeno en diversas especies bacterianas de interés clínico. La finalidad de este trabajo fue desarrollar un método objetivo para cuantificar la invasión en agar de especies bacterianas mediante análisis de imagen.
MATERIAL Y MÉTODOS
Se emplearon cuatro cepas de Enterococcus faecalis procedentes de aislados clínicos. A partir de suspensiones de 105 UFC/ml, se sembraron 10 gotas de cinco microlitros de cada cepa sobre Mueller-Hinton y se incubaron durante 4 días a35ºC. Una vez lavadas las placas para eliminar el crecimiento bacteriano sobre el medio de cultivo, el agar se tiñó con azul de metileno al 0.5%. El crecimiento en el interior del agar (huella de invasión) fue visualizado con un microscopio óptico a 50x y fotografiado con una cámara digital acoplada al microscopio. Empleando un sistema de análisis de imagen se desarrolló una aplicación específica para procesar las imágenes correspondientes a las huellas de invasión que permitía cuantificar automáticamente área total y relativa de la invasión, número total de invasiones, número de invasiones por unidad de superficie y área media de cada invasión. Estas medidas se realizaron de manera global y agrupando las invasiones en clases por tamaño. Los resultados se trataron estadísticamente, calculándose la media, desviación estándar y coeficiente de variación.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
De las variables cuantificadas, los mejores resultados se obtuvieron con el número de invasiones por unidad de superficie, con un coeficiente de variación inferior al 10% en todas las cepas estudiadas y con el área media por invasión, con un coeficiente de variación inferior al 15%. Posiblemente estos parámetros estén en relación directa con el porcentaje de individuos de una población que exhiba el carácter fenotípico “capacidad de invasión del agar” y con la velocidad de crecimiento de esta subpoblación. La metodología aquí descrita permitirá estudiar, por un lado, la relación entre el grado de invasión en agar y la patogenicidad de distintas especies y cepas y, por otro lado, la respuesta de las mismas a los antimicrobianos.
BIBLIOGRAFÍA
Gómez-Aguado, F; Gomez-Lus, ML; Corcuera, MT, et al . Rev Esp Quimioter 2009;22:224-227.
Gómez-Aguado F, Alou L, Corcuera MT, et al. Microsc Res Tech. 2010 Dec 30 [En prensa]. doi: 10.1002/jemt.20977.
Palabras clave: Invasion Enterococcus faecalis; Análisis de imagen;
