RT-PCR para la determinación del tipode los virus de la gripecirculantes entre la poblaciónR. Cisterna, E. Meabe y Grupo de Estudio de la Gripe de la Sociedad Española de Quimioterapia RESUMEN Se ha usado la transcripción inversa-reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR) para determinar el tipo de los virus de la gripe que circularon mayoritariamente entre la población del País Vasco durante la temporada 1999-2000. Durante este tiempo, se analizaron 124 aspirados nasales y faríngeos de personas con síntomas similares a los de la gripe. Las muestras fueron analizadas en paralelo mediante cultivo convencional o shell-vial en línea celular MDCK, e inmunofluorescencia y RT-PCR múltiple para la detección del virus de la gripe y sus tipos A y B. De las muestras estudiadas, 57 (45,96%) resultaron positivas para el tipo A por cultivo y 64 (51,61%) mediante la RT-PCR de una región del genoma que codifica las proteínas no estructurales NS1 y NS2. Desarrollamos también un método de detección rápida en el que transcripción y amplificación se llevan a cabo en un único paso, empleando la misma mezcla de transcripción-amplificación. A la vista de los resultados podemos concluir que la RT-PCR es una técnica muy sensible para la detección de los virus de la gripe; esta sensibilidad, combinada con su rapidez, creemos que la hacen idónea para la detección de estos virus respiratorios y el análisis de las cepas circulantes en la población. SUMMARY Reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) was used to determine the type of flu virus that was circulating mostly in the population of the Basque Country in the 1999-2000 season. In this time period, 124 nasal and pharyngeal aspirations from persons with flu-like symptoms were analyzed. A parallel analysis was carried out using a conventional culture or a shell-vial in MDCK cell line, and immunofluorescence and multiple RT-PCR for the detection of influenza virus and its A and B types. Of the samples studied, 57 (45.96%) were positive for type A by the culture method and 64 (51.61%) by RT-PCR of a genomic region that codifies the non-structural proteins NS1 and NS2. We also developed a rapid-detection method in which the transcription and amplification are carried out in a single step, using the same mix of transcription-amplification. Based on the results we can conclude that RT-PCR is a very sensitive method for the detection of the flu virus; we believe that its sensitivity, combined with its rapidity, makes it ideal for the detection of these respiratory viruses and the analysis of strains circulating in the population. |