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APLICACIÓN DE MÉTODOS HISTOLÓGICOS PARA MICROSCOPÍA ÓPTICA Y ELECTRÓNICA AL ESTUDIO MORFOLÓGICO DE COLONIAS/POBLACIONES MICROBIANAS

Autores:
Fernando Gomez-Aguado*. Unidad de Anatomía Patológica, Hospital Carlos III. Madrid. España
Maria Teresa Corcuera. Unidad de Anatomía Patológica, Hospital Carlos III. Madrid. España
M Carmen Ramos. Area Microbiología, Facultad de Medicina UCM. Madrid. España
M Luisa Gómez-Lus. Área de Microbiológia, Facultad de Medicina UCM. Madrid. España
M. José Alonso. Unidad de Anatomía Patológica, Hospital Carlos III. Madrid. España
José Prieto. Area Microbiología, Facultad de Medicina UCM. Madrid. España

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INTRODUCCIÓN

Recientes trabajos apoyan la hipótesis de que las colonias microbianas son tipos especiales de biopelículas que evolucionan en la interfase entre un medio sólido nutritivo (agar) y otro gaseoso. Como tal biopelícula se espera que presenten una estructura interna compleja, mostrando cierto paralelismo con la organización de las células eucariotas en tejidos. Por ello planteamos la utilidad de las técnicas de procesamiento histológico para microscopía óptica y electrónica aplicada al estudio morfológico de colonias microbianas.

MATERIAL Y MÉTODOS

Cepas de especies pertenecientes a los géneros Staphylococcus, Streptococcus, Enterococcus, Escherichia, Mycobacterium, Bacillus y Candida fueron cultivadas en medios sólidos de cultivo e incubadas en condiciones óptimas para la obtención de colonias típicas de cada una de ellas. Colonias aisladas fueron procesadas por métodos histológicos convencionales de inclusión en parafina y resina epoxi para estudios por microscopía óptica y electrónica, respectivamente. Secciones transversales finas (4 µm), semifinas (0.5 µm) y ultrafinas (50 nm) de las colonias fueron teñidas con las técnicas de Hematoxilina-Eosina, Giemsa, Gram, Ziehl-Neelsen, PAS-alcián, Wirtz-Conklin, azul de toluidina y citrato de plomo.

 RESULTADOS Y DISCUSIÓN

La metodología histológica empleada, consistente en sustituir el agua por un medio de inclusión sólido que permite realizar secciones de distinto grosor y diversas tinciones histoquímicas, resulta válida para el estudio de la estructura interna de colonias microbianas. Así, la microscopía óptica, tanto de secciones finas, como semifinas, puso de manifiesto que las distintas especies mostraron patrones de organización interna diferentes y específicos de cada una de ellas, basados en la mayoría de los casos en multiestratificación, con alternancia de estratos de diferente densidad óptica y poblacional. La microscopía electrónica permitió confirmar la viabilidad de las células en los diferentes estratos, así como objetivar el nivel de degradación de los restos bacterianos.

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Palabras clave: Métodos microscópicos; Poblaciones bacterianas;