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EVALUACIÓN DE UN MÉTODO ABREVIADO DE EXTRACCIÓN PARA LA IDENTIFICACIÓN DE LEVADURAS Y BACILOS GRAM NEGATIVOS MEDIANTE ESPECTROMETRÍA DE MASAS MALDI-TOF

Autores:
MARIA SILLER RUIZ*. HOSPITAL UNIVERSITARIO DE SALAMANCA. SALAMANCA. España
NOELIA CALVO SÁNCHEZ. HOSPITAL UNIVERSITARIO DE SALAMANCA. SALAMANCA. España
MÓNICA DEFRUTOS SERNA. HOSPITAL UNIVERSITARIO DE SALAMANCA. SALAMANCA. España
Mª INMACULADA GARCÍA GARCÍA. HOSPITAL UNIVERSITARIO DE SALAMANCA. SALAMANCA. España
JUAN LUIS MUÑOZ BELLIDO. HOSPITAL UNIVERSITARIO DE SALAMANCA. SALAMANCA. España

INTRODUCCIÓN. La espectrometría de masas (EM) MALDI-TOF se ha convertido en un método de identificación de referencia en bacteriología y micología, con un nivel defiabilidad, en muchos casos, equiparable a los métodos genéticos. Aunque la metodología más ortodoxa es la extracción de las proteínas con etanol y ácido fórmico, previamente al depósito del extracto en la placa (groundsteel) del espectrómetro y la adición de la matriz, la experiencia muestra que la aplicación de una extensión fina sobre la placa directamente de la colonia, y la adición sobre ella de la matriz, puede dar un resultado satisfactorio, siendo además un método mucho más rápido y sencillo. Sin embargo, en algunos microorganismos, este método da con frecuencia scores insuficientes para una identificación fiable, por lo que hay que recurrir al método de extracción. Recientemente se ha descrito (Haigh et al, J Clin Microbiol 2011, Sep;49(9):3441) un método abreviado de extracción que parece mejorar los scores en estos microorganismos con una metodología mucho más sencilla, similar al método directo. Se ha determinado en un grupo de aislamientos clínicos de levaduras y de bacilos Gram negativos la eficacia de este método, en comparación con el método convencional de aplicación directa.

MATERIAL Y MÉTODOS. Se identificaron 29 aislamientos clínicos de Levaduras y 44 de bacilos Gram negativos por EM MALDI-TOF (Microflex, Bruker Daltonics, Alemania) por aplicación directa, y mediante el método propuesto por Haigh et al.. Dicho método consiste en realizar una aplicación directa sobre la placa del espectrómetro y, una vez seca, añadir 1 ml de ácido fórmico puro. Se deja secar, y se procede a añadir la matriz e identificar del modo habitual.

RESULTADOS. Los resultados obtenidos en levaduras  aparecen en la Tabla 1.

Microorganismo (n)

Mét. Directo (x, intervalo)

Extracción abreviado (x, intervalo)

C. albicans (13)

1,233 (0-1,997)

1,899 (1,736-2,079)

C. glabrata (6)

1, 479 (1,335-1,707)

1,976 (1,760-2,187)

C. tropicalis (2)

1,772 (1,589-1,955)

1,994 (1,952-2,037)

C. krusei (3)

1,265 (0-1,936)

2,246 (2,184-2,289)

C. robusta (2)

1,484 (1,167-1,801)

2,224 ((2,184-2,265)

C. parapsilosis  (2)

1,6 (1,453-1,748)

1,952 (1,931-1,974)

C. guillermondii (1)

1,966

2,241

TOTAL Gen. Candida  (29)

1,543 (0-1,997)

2,076 (1,736-2,289)

 Por el contrario, en Gram negativos no ofreció ventajas significativas. Ha de tenerse en cuenta que, de las 9 especies estudiadas, todas excepto Serratia tuvieron un score medio > 2 ya en el método directo, con lo que el margen de mejora era escaso. Serratia  tuvo unos score medios de 1,862 en el método directo y 1,961 en el abreviado.

DISCUSIÓN. El nuevo método propuesto tiene una rapidez y sencillez similares al método directo, e incrementa sensiblemente los scores obtenidos para la identificación de levaduras. Por el contrario, los scores obtenidos en Gram negativos son similares a los obtenidos por método directo, que en la mayor parte de los casos ya permitían una identificación a nivel de especie con scores plenamente fiables.

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