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Identificación bacteriana directa del frasco de hemocultivo BACTEC® positivo utilizando MALDI-TOF
Autores:
Fernando González Romo*. Hospital Clínico San Carlos. Madrid. España
F. de la Torre. Hospital Clínico San Carlos. Madrid. España
M.E. Salas Pérez. Hospital Clínico San Carlos. Madrid. España
M. Martínez Rodríguez. Hospital Clínico San Carlos. Madrid. España
Juan J. Picazo. Hospital Clínico San Carlos. Madrid. España
Introducción:
El hemocultivo resulta una de las muestras microbiológicas de mayor importancia clínica. Desgraciadamente en su procesamiento habitual es necesaria la realización de subcultivos que pueden retrasar la orientación diagnóstica sobre el agente etiológico implicado en la bacteriemia. El objetivo de este estudio ha sido comprobar si MALDI-TOF puede reducir este tiempo manteniendo la fiabilidad.
Métodos:
Se partió de los frascos de hemocultivos Bactec® positivos consecutivos durante 10 días en los que la tinción de Gram mostrase cocos grampositivos o bacilos gramnegativos. Se transfirió 1 ml de sangre de los frascos a un tubo Eppendorf® y se añadió 200 µL de Solución 1 (Bruker®). Se centrifugó durante 1 minuto a 13.000 rpm a cuyo sedimento, tras desechar el sobrenadante, se añadió 1 mL de Solución 2 (Bruker®) y se centrifugó de nuevo 1 minuto a 13.000 rpm. Al sedimento se añadió 300 µL de agua destilada y -tras resuspender- 900 µL de etanol. Finalmente se realizó el protocolo estándar de extracción con ácido fórmico y acetonitrilo y se obtuvo espectro de masas mediante MALDI-TOF (Bruker®). Las muestras se cultivaron y del crecimiento se identificaron las colonias utilizando MALDI-TOF y tarjetas Vitek-2. (BioMerieux®).
Resultados:
Se descartaron del análisis 7 hemocultivos en los que el crecimiento en placa mostró dos tipos diferentes de colonias. De los 75 hemocultivos restantes la identificación fue coincidente en 69 (92,0%). Se visualizaron cocos grampositivos en racimos en 54 hemocultivos cuya identificación directa con MALDI-TOF mostró 5 especies diferentes de Staphylococcus (S. epidermidis, S. hominis, S. aureus, S. haemolyticus y S. lugdunensis), de las cuales 49 se confirmaron al día siguiente (90,7%), en 4 casos no se obtuvieron picos suficientes para poder identificarlos creciendo en los subcultivos S. epidermidis y en 1 caso se obtuvo inicialmente S. hominis que posteriormente se identificó como S. epidermidis. Se vieron bacilos gramnegativos en 12 de los que se confirmó la identificación de 6 especies distintas (E. coli, P. aeruginosa, K. pneumoniae, K. oxytoca, M. morganii, y S. marcescens) en 11 de ellos (91,7%), en 1 caso no se pudo identificar la bacteria y posteriormente creció E. coli de colonia mucosa. Se identificaron cocos grampositivos en cadenas en 9 hemocultivos y se confirmaron posteriormente las 9 identificaciones (100%) de 5 especies distintas (S. pyogenes, E. faecalis, E. faecium, S. agalactia y S. pneumoniae).
Conclusiones:
1)La identificación directa desde el frasco de hemocultivo positivo mediante MALDI-TOF resulta muy equivalente con la identificación posterior a partir del crecimiento en los subcultivos. 2)La utilización de MALDI-TOF directo del frasco de hemocultivo positivo permite adelantar el resultado de la identificación bacteriana al menos en 24 horas y en ocasiones más de 48 horas según el método qué se emplee. 3)Dependiendo del microorganismo responsable de la bacteriemia este adelanto en el resultado puede mejorar significativamente el cuidado del paciente y el manejo de la infección.
Palabras clave: Hemocultivo;
