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INVASIÓN DEL MEDIO SÓLIDO POR BACTERIAS DE INTERÉS CLÍNICO
Autores:
María Teresa Corcuera. Unidad de Anatomía Patológica, Hospital Carlos III. Madrid. España
Fernando Gomez-Aguado*. Unidad de Anatomía Patológica, Hospital Carlos III. Madrid. España
M Luisa Gómez-Lus. Area Microbiología, Facultad de Medicina UCM. Madrid. España
M Carmen Ramos. Area Microbiología, Facultad de Medicina UCM. Madrid. España
M. José Alonso. Unidad de Anatomía Patológica, Hospital Carlos III. Madrid. España
José Prieto. Area Microbiología, Facultad de Medicina UCM. Madrid. España
INTRODUCCIÓN.- Algunos géneros microbianos se describen como invasores del medio sólido (Eikenella, Mycoplasma, Candida, Saccharomyces, Actinobacillus). Esta característica se ha considerado como un potencial factor de virulencia en levaduras. En trabajos recientes sobre arquitectura colonial de especies microbianas con interés clínico, nuestro grupo ha observado este fenómeno con notable frecuencia en colonias de medio y largo plazo de evolución de especies no descritas como invasoras. El objetivo de este trabajo es estandarizar una metodología que permita caracterizar la invasión en medio sólido de especies bacterianas a fin de poder valorar la importancia biológica y clínica de este fenómeno.
MATERIAL Y MÉTODOS.- Se han estudiado un total de 120 cepas procedentes de aislados clínicos correspondientes a Staphylococcus (30 cepas), Enterococcus faecalis (10 cepas), Streptococcus viridans (20 cepas), Streptococcus pneumoniae (10 cepas), Escherichia coli (20 cepas), Salmonella spp (10 cepas), Klebsiella spp (10 cepas) y bacilos Gram (-) no fermentadores (10 cepas). Las cepas se sembraron por triplicado en agar común, agar nutritivo, agar Mueller-Hinton y agar Mueller-Hinton sangre y se incubaron durante 3, 4, 5, 6 y 7 días a 35ºC en aerobiosis. La siembra se realizó en forma de spot, mediante gotas de 3, 5 y 10 μl a partir de suspensiones bacterianas de 105 y 107 UFC/ml. Transcurrido el tiempo de incubación se lavó la superficie de las placas por el método descrito por Roberts y Fink (1994) modificado y se tiñó con azul de metileno al 0.5%. Finalmente, las placas se visualizaron con lupa binocular a 10 aumentos, valorándose la existencia, cantidad y distribución de invasiones. Todas las valoraciones fueron realizadas por dos observadores independientes. La invasión se corroboró en varios controles mediante cortes microscópicos semifinos y teñidos con azul de toluidina.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.- Los mejores resultados se obtuvieron con spot de 5 μl de una suspensión de 105 UFC/ml en agar Mueller-Hinton incubado 4 días. En estas condiciones, todas las cepas invasoras presentaron múltiples puntos de invasión del agar, variables en tamaño y forma (irregular, arborescente, globular, lenticular), dando lugar a una “huella de invasión” característica de cada cepa. Estas huellas permiten definir cuatro patrones semicuantitativos según la intensidad desde (-) cuando no hay invasión hasta 3(+) cuando se percibe una invasión masiva. Según la localización espacial de las invasiones se describieron también tres patrones de distribución: periférico, homogéneo y mixto. En todos los grupos estudiados se identificaron cepas invasoras en porcentaje variable (entre el 13.3% y el 86.6%) excepto Streptococcus pneumoniae que no mostró esta característica en ninguna de las cepas analizadas. La invasión del medio de cultivo, tal y como se define en este trabajo, es un carácter fenotipico variable según especies y cepas, que puede tener cierta relevancia en términos ecológicos y de dinámica de poblaciones. Los resultados obtenidos apoyan la hipótesis de la existencia de subpoblaciones que portan este carácter justificando así, los distintos patrones de invasión observados. Se plantean interrogantes como: ¿Tiene la invasión importancia en el desarrollo de los biofilm? ¿Es un fenómeno relevante en la patogenia de la infección? ¿Se puede inhibir o seleccionar mediante antimicrobianos? Estudios futuros con técnicas cuantitativas permitirán responder algunos de ellos.
BIBLIOGRAFÍA.- 1) Gómez-Aguado F, Gómez-Lus ML, Corcuera MT, et al. Rev Esp Quimioter 2009; 22: 224-7. 2) Gómez-Aguado F, Alou L, Corcuera MT, et al.Microsc Res Tech 2010. doi:10.1002/jemt.20977.
Palabras clave: Invasion medio sólido; Cuantificación;
