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Epidemiología molecular de M. tuberculosis con resistencia a fármacos de primera línea
Autores:
Manuel Causse. Servicio de Microbiología. H.U. Reina Sofía. Cordoba. España
Pilar Ruiz*. Departamento de Microbiología. Faculta de Medicina. Cordoba. España
Juan Bautista Gutierrez Aroca. Servicio de Microbiología. H.U. Reina sofía . cordoba. España
Manuel Casal Roman. Servicio de Microbiología. H.U. Reina Sofía. Cordoba. España
INTRODUCCION Y OBJETIVOS
Genotipar M. tuberculosis responde al objetivo entre otros de evaluar la expansión interterritorial de cepas.
Se puede realizar mediante técnicas como Spoligotyping, MIRU-VNTR y RFLP IS6110. Entre ellas la capacidad de discriminación entre cepas varia, utilizándose las dos primeras para encontrar cepas con alto porcentaje de similitud y la última para confirmar esta relación.
Nuestro objetivo fue realizar el genotipado y por lo tanto probar la relación entre cepas con alguna resistencia a fármacos de primera línea.
MATERIAL Y MÉTODO
Se estudiaron 104 cepas de las que se seleccionaron las resistentes en el antibiograma de primera línea analizándolas individualmente por cada fármaco.
Se empleó una técnica basada en tecnología rep-PCR denomina Diversilab (Biomérieux®). La extracción se realizó mediante una modificación del protocolo del Ultra Clean Microbial DNA Isolation Kit. A continuación se procedió a la rep-PCR en el termociclador Applied 9700 y el análisis de los fragmentos se realizó en un chip mediante electroforesis capilar en el Agilent 2100 Bioanalyzer. Estos datos eran analizados en mediante el sistema informático de Diversilab a través de página web que permite la comparación entre las cepas probadas en el laboratorio, así como cepas procedentes de librerías.
RESULTADOS
Entre las cepas testadas 8 eran fenotipicamente resistentes a Rifampicina y no se encontró ningún clon. Tampoco entre las 5 resistentes a Etambutol ni las 4 con resistencia a Pirazinamida. Entre las 13 resistentes a Estreptomicina observamos un clon con tres cepas y otro con dos. Y de las 15 resistentes a Isoniazida tres clones, uno de tres cepas y los otros de solo dos.
Se analizaron para el correcto funcionamiento de la técnica una cepa obtenida del mismo paciente que si resultó en un 97% de similitud
CONCLUSIONES
El sistema de tipado Diversilab parece distinguir correctamente entre clones de cepas.
Existe una amplia variabilidad entre las cepas con algún patrón de resistencia, encontrándose algunos clones entre las resistencias mas frecuentes a antituberculosos de primera línea
Palabras clave: diversilab; M. tuberculosis;
