Detección de fenotipos de resistencia en aislamientos clínicos de Klebsiella pneumoniae y Escherichia coli multidrogorresistentes

Autores:
Marcia Hart Casares*. HCQ Hermanos Ameijeiras . habana. Cuba
Bettsy Suarez Trueba. HCQ Hermanos Ameijeiras . habana. Cuba
Fidel Espinosa Rivera. HCQ Hermanos Ameijeiras . habana. Cuba
Zurelys Montes de Oca. HCQ Hermanos Ameijeiras . habana. Cuba

Desde mediados del siglo pasado el hombre se enfrenta a la resistencia bacteriana. Las enterobacterias, y en particular E. coli y K. pneumoniae  constituyen un problema de salud debido al alto porcentaje de aislamientos en muestras clínicas, así como el hallazgo de resistencia a múltiples familias de antimicrobianos.  Para conocer el comportamiento de estas bacterias en el contexto local se realizó un estudio descriptivo-observacional y prospectivo en 150 aislamientos provenientes de pacientes graves ingresados en el Hospital Clínico Quirúrgico Hermanos Ameijeiras y se determinó la susceptibilidad antimicrobiana y los mecanismos fenotípicos de resistencia en cepas multidrogorresistentes por método cuantitativo automatizado (vitek 2 compact). Posteriormente se analizó la distribución de estos microorganismos  y los  factores de riesgo presentes en los pacientes con infecciones producidas por estas cepas. El  75,6%  de los aislamientos fueron de pacientes hospitalizados en  las unidades  de cuidados intensivos y el 42,9% de los mismos fueron obtenidos de muestras de hemocultivos. Todas las familias de antimicrobianos estudiadas mostraron elevados porcientos de resistencia, siendo las piperazilina con tazobactam y los carbapenémicos los más efectivos. El 90,0% de las cepas presentó betalactamasas de espectro ampliado,  resultando las  betalactamasas de espectro extendido las más frecuentes frente a betalactámicos y la acetiltransferasa [AAC (6´)] frente a los aminoglucósidos. El uso previo de antibióticos estuvo presente en la totalidad de los pacientes, de los cuales se aislaron las cepas y el 80,0% de ellos presentaron tres factores de riego o más.

Palabras clave: resistencia microbiana;

DISTRIBUCION DE BETALACTAMASAS DE ESPECTRO EXTENDIDO Y AmpC PLASMÍDICA EN Escherichia coli EN UN HOSPITAL DE TERCER NIVEL

Autores:
Fátima Galán-Sánchez*. HU Puerta del Mar. Cádiz. España
Pilar Aznar-Marín. HU Puerta del Mar. Cádiz. España
Inmaculada Guerrero-Lozano. HU Puerta del Mar. Cádiz. España
Juan Manuel Sánchez-Calvo. HU Puerta del Mar. Cádiz. España
Pilar Marín-Casanova. HU Puerta del Mar. Cádiz. España
Manuel Rodríguez-Iglesias. HU Puerta del Mar. Cádiz. España

Objetivos: Tanto las betalactamasas de espectro extendido (BLEE), como las AmpC plasmídicas (AmpCp), son un problema creciente, tanto a nivel nosocomial como extrahospitalario, por la facilidad que tiene su diseminación entre microorganismos como Escherichia coli, el cual es el microorganismo más frecuentemente aislado en muestras clínicas. El objetivo de este trabajo es analizar la proporción de cepas de E. coli portadoras de BLEE y AmpCp y estudiar los patrones de resistencia a los diferentes grupos de antimicrobianos para ver si existen  relación entre estos plásmidos y la resistencia a otros grupos de antibióticos diferentes de los betalactámicos.

Materiales y Métodos: Desde el 1 de Julio de 2010  al 30 de Junio de 2011 se identificaron 2639 cepas de E.coli en muestras clínicas remitidas al Laboratorio de Microbiología del Hospital Universitario Puerta del Mar de Cádiz. La identificación y sensibilidad de los aislados se realizó mediante el sistema automatizado Wider (Soria-Melguizo). La identificación de las cepas portadoras de BLEE se confirmó mediante la utilización de tiras de E-Test de cefotaxima, ceftriaxona y cefepime con y sin ácido clavulánico. La presencia de AmpCp (CIT y DHA) se determinó mediante PCR-multiplex.

Resultados: Del total de cepas, 156 (5,9%) eran portadoras de BLEE y 23 (0,9%) poseían AmpCp, 22 del grupo CIT y 1 del grupo DHA. En dos cepas se detectó la presencia simultánea de  AmpCp y  BLEE, y en otra cepa la presencia de AmpCp y dos carbapenemasas, VIM y KPC.  La mayoría de las cepas portadoras de BLEE eran de origen ambulatorio (64.1%), mientras que la detección de AmpCp fue similar en las muestras de origen ambulatorio y hospitalario. Todas las cepas portadoras de BLEE y AmpCp fueron resistentes a todas las cefalosporinas de 3ª generación. El cefepime mostró una sensibilidad del 95,6% en cepas sin BLEE ni AmpCp, mientras que en aquellas que poseían AmpCp, la sensibilidad fue del 77,8%. Piperacilina/tazobactam mostró una sensibilidad parecida entre los tres grupos de estudio. En las cepas portadoras de BLEE encontramos una sensibilidad disminuida a otros antibióticos como ciprofloxacino, cotrimoxazol, gentamicina y tobramicina (23,3%, 52,5%, 73,6% y 63,8%, respectivamente) con respecto a aquellas que no tenían ni BLEE ni AmpCp (71,3%, 71,3% 90,1% y 89,7%, respectivamente), mientras que las cepas portadoras de AmpCp tuvieron un comportamiento similar a las cepas sin BLEE.

Conclusiones: La presencia de BLEE en E.coli parece condicionar la resistencia a otros grupos de antibióticos probablemente por la presencia de determinantes genéticos de resistencia incluidos en el mismo plásmido. Con respecto a las cepas con AmpCp, no parece que en esos plásmidos vayan asociados otros determinantes genéticos que condicione resistencia a otros grupos. La menor sensibilidad a cefepime en este grupo se deba probablemente a la presencia simultánea de betalactamasa tipo OXA. Se necesita la realización de estudios con un mayor número de cepas con AmpCp para confirmar estos datos.

Palabras clave: BLEE; AmpCp; Escherichia coli;

Prevalencia de genes codificadores de resistencia a fluoroquinolonas de localización plasmídica (RPFQ) en enterobacterias aisladas en la Región de Murcia.

Autores:
Míriam Albert Hernández*. Servicio de Microbiología. H.U. Virgen de la Arrixaca. Murcia. España
Genoveva Yagüe Guirao. Servicio de Microbiología. H.U. Virgen de la Arrixaca. Murcia. España
Juan Luis Muñoz Bellido. Servicio de Microbiología. H.Clínico Universitario de Salamanca. Salamanca. España
Marta Fernández Vázquez. Complejo Hospitalario de León. León. España
Manuel Segovia Hernández. Servicio de Microbiología. H.U. Virgen de la Arrixaca. Murcia. España

Objetivo: El objetivo de nuestro estudio fue conocer la prevalencia de los diferentes mecanismos plasmídicos de resistencia a fluoroquinolonas (RPFQ) (genes qnrA, qnrB, qnrS, aac(6’)-Ib-cr y qepA) en aislamiento clínicos de las principales especies patógenas de enterobacterias, y su asociación con la producción de BLEEs, en la región de Murcia.

Material y métodos: Se estudiaron 300 aislamientos consecutivos de enterobacterias (166 Escherichia coli, 49 Klebsiella pneumoniae, 7 Klebsiella oxytoca, 28 Proteus mirabilis, 13 Enterobacter cloacae, 13 Serratia marcescens, 13 Salmonella enteritidis, 7 Citrobacter freundii, 2 Enterobacter aerogenes, un aislamiento de Citrobacter koseri y otro de Morganella morganii) obtenidos en el Hospital Universitario Virgen de la Arrixaca (Murcia). La identificación y sensibilidad se realizó con el sistema automatizado Vitek2 (Biomerieux). La detección de los genes qnrA, qnrB, qnrS, aac(6’)-Ib-cr y qepA se realizó mediante PCR múltiple utilizando primers específicos. La presencia de BLEEs se confirmó mediante el método de sinergia siguiendo los criterios del CLSI

Resultados: De los 300 aislamientos, 20 (6.7%) (12 E. coli, 5 K. pneumoniae, 2 C. freundii, y un aislamiento de E. cloacae) presentaron algún mecanismo plasmídico de resistencia a fluoroquinolonas. De ellos, 16 portaron genes qnr, un aislamiento de K. pneumoniae qnrA, 12 aislamientos qnrB (4 K. pneumoniae, 5 E. coli, 2 C. freundii y un aislamiento de E. cloacae) y 3 aislamientos de E. coli qnrS. Los genes codificadores del enzima aac(6’)-Ib-cr se detectaron en 7 cepas (4 E. coli, y 3 K. pneumoniae). Se observó coexistencia de los mecanismos de resistencia qnr y aac(6’)-Ib-cr en 3 aislamientos de K. pneumoniae (2 qnrB + aac(6’)-Ib-cr y uno qnrA + aac(6’)-Ib-cr). No se detectaron genes qnrC ni codificantes de la bomba de extrusión qepA.

La prevalencia global de BLEEs entre nuestras cepas fue del 13.7% (41/300). En 10 (24.4%) de estos aislamientos con BLEEs, se observó la asociación con RPFQ: un aislamiento qnrA, 3 qnrB, 2 qnrS y 7 aac(6’)-Ib-cr, encontrándose entre ellos las tres cepas que presentaron coexistencia de qnr y aac(6’)-Ib-cr. En los otros 10 aislamientos con RPFQ pero sin presencia de BLEEs, la distribución fue la siguiente: 9 aislamientos qnrB-positivos y sólo un aislamiento qnrS-positivo.

Conclusión: En nuestra área, de forma global, un 6.7% de los aislamientos clínicos de enterobacterias fueron portadores de algún mecanismo de RPFQ, siendo la presencia de genes qnrB el encontrado con más frecuencia. Entre las cepas productoras de BLEEs, un 24.4% presentan de forma concomitante genes codificadores de RPFQ, siendo los más prevalentes los codificantes del enzima aac(6’)-Ib-cr. Hay que destacar que el 50% de las cepas en las que se detectaron estos genes fueron productoras de BLEEs.

Palabras clave: BLEEs; enterobacterias; RPFQ;

MUTACIONES EN TOPOISOMERASAS ASOCIADAS A RESISTENCIA A FLUOROQUINOLONAS EN Escherichia coli PRODUCTORES DE BLEE

Autores:
MAGDALENA GONZÁLEZ ÁVILA. HOSPITAL UNIVERSITARIO DE SALAMANCA. SALAMANCA. España
MARTA FERNÁNDEZ VÁZQUEZ. COMPLEJO HOSPITALARIO DE LEÓN. LEÓN. España
MIRIAM ALBERT HERNÁNDEZ. H.U. VIRGEN DE LA ARRIXACA. MURCIA. España
ISABEL FERNÁNDEZ NATAL. COMPLEJO HOSPITALARIO DE LEÓN. LEÓN. España
GENOVEVA YAGÜE GUIRAO. H.U. VIRGEN DE LA ARRIXACA. MURCIA. España
JUAN LUIS M UÑOZ BELLIDO*. HOSPITAL UNIVERSITARIO DE SALAMANCA. SALAMANCA. España

INTRODUCCIÓN. La producción de BLEE en enterobacterias va, en general, asociada a una mayor frecuencia de resistencia a fluoroquinolonas (RQ), probablemente por verse sometidas a una mayor presión ecológica al no poderse usar antibióticos beta-lactámicos para su tratamiento. La RQ va habitualmente asociada a mutaciones en los genes codificadores de las topoisomerasas, en especial de sus subunidades A (gyrA y parC). Las mutaciones en los genes codificadores de las subunidades B (gyrB y parE), hasta el momento se había demostrado que tenían un papel marginal en esta resistencia. Sin embargo, recientemente se ha demostrado la presencia de mutaciones en parE, externas a la QRDR, que podrían estar vinculadas a un incremento de resistencia, en especial en Gram negativos portadores de BLEE. En el presente estudio se determinan las mutaciones en las subunidades A y B de la girasa y la topoisomerasa IV en aislamientos clínicos de Escherichia coli RQ y productores de BLEE.

MATERIAL Y MÉTODOS. 1. Microorganismos. Se estudiaron 50 aislamientos de Escherichia coli, en su mayoría de origen urinario, con CIMs de ciprofloxacino >2 mg/L, CIM de norfloxacino >32 mg/L y fenotipo de producción de BLEE según los criterios del CLSI. Los aislamientos procedían de los Servicios de Microbiología del Complejo Asistencial de León y del Hospital Universitario de Salamanca. 2. Métodos. Se amplificaron los genes gyrA, gyrB, parC y parE o fragmentos específicos de los mismos mediante PCR. Dichos fragmentos fueron posteriormente secuenciados según el método de Sanger.

RESULTADOS. Los resultados aparecen reflejados en la Tabla 1.

Tabla 1 . Mutaciones en gyrA, gyrB, parC y parE en 50 aislamientos clínicos de E. coli productores de BLEE y RQ.

DISCUSIÓN. Todas las cepas productoras de BLEE y RQ presentan un importante acúmulo de mutaciones en gyrA y parC, con excepción de una cepa, que presentaba una sóla mutación en Ser83 en gyrA, distinta del habitual cambio a leucina. Prácticamente la mitad de las cepas acumulaban una doble mutación en gyrA y parC. Un 4% presenta además una mutación en Ser458 en parE, identificada en asociación a cepas productoras de BLEE, y que ha sido recientemente descrita como una mutación en franca expansión en algunas áreas geográficas.

Palabras clave: resistencia; BLEE; Fluoroquinolonas;

Caracterización de cepas de E. coli y K. pneumoniae productoras de betalactamasas de espectro extendido (BLEE) en dos hospitales de Murcia.

Autores:
Cristina Casañ López . Hospital Universitario José María Morales Meseguer . Murcia. España
Carme Salvador García*. Hospital Universitario Virgen de la Arrixaca. Murcia. España
Genoveva Yagüe Guirao . Hospital Universitario Virgen de la Arrixaca. Murcia. España
Carmen Guerrero Gómez . Hospital Universitario José María Morales Meseguer . Murcia. España
Rosa Blázquez Garrido . Hospital Universitario José María Morales Meseguer . Murcia. España
Manuel Segovia Hernández. Hospital Universitario Virgen de la Arrixaca. Murcia. España

Objetivo: El objetivo de nuestro trabajo fue conocer las características clínico-epidemiológicas de las infecciones producidas por cepas de E. coli y K. pneumonaie productoras de BLEE aisladas en dos hospitales de Murcia en el periodo de un mes, así como realizar la caracterización molecular de estas enzimas y determinar la relación clonal de los aislamientos intrahospitalarios.

Material y Métodos: Se realizó un estudio prospectivo de aislados consecutivos de E. coli y K. pneumoniae productoras de BLEE obtenidos en el hospital Universitario Virgen de la Arrixaca (HUVA) y el hospital José María Morales Meseguer (HMM) en el periodo de un mes. La identificación y sensibilidad se realizó con sistemas automatizados diferentes en cada hospital (Vitek2® y MIcroscan®, respectivamente). La presencia de BLEEs se confirmó mediante el test de sinergia con clavulánico siguiendo los criterios del CLSI. Se diseñó un protocolo para obtención de los datos demográficos y clínico-epidemiológicos de los pacientes. La caracterización de las BLEEs se realizó mediante PCR-múltiple con primers específicos y posterior secuenciación. Los aislados intrahospitalarios fueron tipificados mediante REP-PCR.

Resultados: Se recogieron un total de 83 cepas, 72 fueron E. coli y 11 fueron K. pneumoniae. La prevalencia de E. coli y K. pneumoniae productoras de BLEE fue de 9,3% y 10%  respectivamente. La mayoría de las cepas procedían de muestras de orina (85%), por tanto, la infección urinaria fue la más frecuente. El 26,5% de las infecciones fueron de adquisición comunitaria, el 50,6% asociadas a cuidados sanitarios (ACS) y el 23% nosocomiales. Se recogieron datos clínicos de los pacientes. De éstos, el 97% presentaron enfermedades de base y más de la mitad (60%) habían recibido tratamiento antibiótico en los últimos tres meses. El 80,6% de las cepas de E. coli productoras de BLEE fueron resistentes a ciprofloxacino y el 74% a cotrimoxazol. En el caso de K. pneumoniae, fueron resistentes a ciprofloxacino y cotrimoxazol el 82% y 45,5% respectivamente. En cuanto al tipo de BLEE producida por estas cepas, la familia más frecuente fue la CTX-M (81,9%) y dentro de esta el CTX-M 14 supuso el 45,9%, seguida de CTX-M 1 (22,9%) y CTX-M 15 (9,8%). La familia SHV representó un 11,9% del total. Sólo se aisló una cepa productora de TEM. La tipificación molecular de los aislados intrahospitalarios mostró una dispersión policlonal en las cepas de E. coli, excepto en dos cepas aisladas en cada uno de los dos hospitales que  presentaron el mismo perfil molecular. Sin embargo, las cinco cepas de K. pneumoniae aisladas en uno de los hospitales se consideraron pertenecientes al mismo clon al compartir el mismo patrón de bandas.

Conclusiones: Se encontró una alta tasa de cepas productoras de BLEE en nuestra área, lo que unido a la alta tasa de resistencia de estas cepas a otros antibióticos, supone un importante problema terapéutico y subraya la necesidad de seguir estudiando estas cepas y establecer los factores que contribuyen a su expansión. La aparición de un clon de K. pneumoniae y pequeños brotes de E. coli, muestra la importancia de realizar estudios de epidemiología molecular que permitan instaurar de forma adecuada medidas de control de la infección.

Palabras clave: E. coli; K. pneumoniae; BLEE;