DESCRIPCIÓN DE UN BROTE DE SARAMPIÓN EN ARAGÓN AÑO 2011

Autores:
Cristina Colmenarejo Serrano*. Servicio de Microbiología y Parasitología Clínica. Hospital Universitario Miguel Servet. Zaragoza. España
Rosa Natalia Baez Lopez. Servicio de Microbiología y Parasitología Clínica. Hospital Universitario Miguel Servet. Zaragoza. España
Mª Angeles Ruiz Andrés. Instituto Aragonés de Ciencias de la Salud. Zaragoza. España
Cecilia Compés Dea. Sección de Vigilancia Epidemiológica. Servicio de Vigilancia en Salud Pública. Dirección General de . Zaragoza. España
Mª Lourdes Roc Alfaro. Servicio de Microbiología y Parasitología Clínica. Hospital Universitario Miguel Servet. Zaragoza. España
Manuel Tomás Omeñaca Teres. Servicio de Microbiología y Parasitología Clínica. Hospital Universitario Miguel Servet. Zaragoza. España

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INTRODUCCIÓN: En el año 1994 se introdujo la segunda dosis a los 11 años de la vacuna triple vírica, desde entonces las coberturas con dos dosis superan el 80%. Desde 1999 las incidencias anuales de sarampión son de <1 caso por 1.000.000 hab. OBJETIVO: Detectar, investigar y caracterizar todos los casos aislados y los pertenecientes al brote de sarampión. MATERIAL Y MÉTODOS: Siguiendo el protocolo descrito en el Plan de eliminación del sarampión y la rubéola en España, se recogieron muestras de sangre, orina y frotis faringeo. Se determinó IgM (ELISA, Enzygnost^®) de forma urgente e IgG (VIDAS^® Measles, Biomerieux) en contactos y en los casos de sospecha. Se realizó una PCR multiplex anidada (MNRT-PCR) según el protocolo desarrollado en el CNM para sarampión, rubéola y parvovirus B19 en muestras de f.faringeo y orina, la positividad para el virus del sarampión se establece con un amplificado de 229pb. Las muestras positivas para IgM y/o PCR fueron enviadas al CNM para su genotipado. RESULTADOS: El primer caso declarado fue un niño de 13 meses el día 10 de marzo. Hasta el 31 de agosto, se han notificado 29 casos de sarampión en Aragón. Cinco casos notificados correspondian a pacientes <15 meses, de los cuales dos habían recibido la primera dosis de la vacuna. Cinco pacientes adultos estaban vacunados. El 29% de los casos fueron pacientes de entre 30-34 años. Se notificó un caso con edad entre 5-9 años. El país de origen de todos los casos es España. El 51,7% de los casos presentaron fiebre, exantema y el 37,9% precisaron hospitalización. Las pruebas serológicas confirmaron el diagnóstico en todos los casos menos en uno (vacunal). Posteriormente mediante genotipado se confirmaron dos de los casos como post-vacunales (genotipo A), estos dos casos correspondían a pacientes menores de 15 meses con sintomatología, la técnica de MNRT-PCR resultó positiva en las muestras de f.faringeo. En 16 de los casos se dispuso de muestras de f.faringeo y/o orina para investigación de sarampión por MNRT-PCR, siendo positiva en todos los casos. Se genotiparon 15 de las cepas, 11 de las muestras genotipadas fueron clasificadas como D4, dos como B3 y dos como genotipo A (vacunal). Diez de los casos confirmados estaban relacionados con algún otro caso confirmado de sarampión. Tres casos se relacionaro epidemiologicamente por trabajar en la misma empresa. CONCLUSIONES: La detección de IgM especifica se ha demostrado como una herramienta sensible y específica como prueba rápida para el diagnóstico urgente de casos de sarampión. La MNRT-PCR utilizada es una excelente prueba complementaria a la detección de IgM, por su alta correlación con la serología y la posibilidad del posterior genotipado.En nuestro medio hemos detectado la circulación de dos genotipos diferentes, similares a los que circulan mayoritariamente por Europa (B3 y D4). Los brotes que afectan a España y a Europa favorecen la importación y reimportación entre las comunidades autónomas y entre países. Se ha producido un caso de sarampión en un niño entre 16 meses y 18 años, grupo de edad que debería haber recibido dos dosis de vacuna según calendario vacunal, en este caso el paciente no había recibido ninguna dosis de la vacuna.

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Palabras clave: PCR; Brote; Sarampión;

 

RESISTENCIAS FRENTE A VIH-1: EVOLUCIÓN Y PREVALENCIA

Autores:
M. Palomo *. Hospital Clínico San Carlos. Madrid. España
A. Suárez. Hospital Clínico San Carlos. Madrid. España
J.J. Picazo. Hospital Clínico San Carlos. Madrid. España

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Objetivos:

Evaluar el perfil de resistencias del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH-1), en nuestros pacientes y compararlo con datos obtenidos en años anteriores para valorar su evolución.

Material y métodos:

Se evaluó un total de 578 estudios de resistencias frente a VIH-1. En 2010 se realizaron 189, 75 en2007 apacientes recién diagnosticados y 314 en2004 apacientes en fracaso múltiple.

El ARN viral fue extraído automáticamente (Cobas AmpliPrep Roche) y detección de carga viral mediante PCR a tiempo real (Cobas TaqMan Roche). Para la secuenciación y estudio de resistencias de las regiones de la transcriptasa inversa y de la proteasa se utilizó el sistema ABI ViroSeq HIV-1 (Abbott) en 2004 y Trugene HIV-1 (Bayer-Siemens) en 2007 y 2010. La interpretación se llevó a cabo con los algoritmos establecidos por los sistemas utilizados y Standford database. El estudio estadístico se realizó con el paquete informático SPSS 15.0.

 Resultados:

En 2010, el 76,2% de los pacientes eran varones. La edad media fue de 39,9 años (21- 80). La media de la carga viral fue de 259941 copias/ml (805–8054000). 117  no se procesaron, por ser muestra insuficiente en 2 casos, inadecuada  en 5 y en 109 no se obtuvo suficiente cDNA para la secuenciación.

Hubo resistencias en el 25,9% de los casos: -13 aanálogos de la nucleótidos: Lamivudina:8, Estavudina:7, Emtracitavina:7, Abacavir:3, Didanosina:3 y Tenofovir:2; – 16  a no-análogos: Efavirenz:14, Nevirapina:14, Etravirina:5; y -35 ainhibidores de proteasa: Saquinavir/ritonavir:20, Fosamprenavir:16, Fosamprenavir/ritonavir:15, Tipranavir/ritonavir:13, Indinavir:8, Indinavir/ritonavir:7, Nelfinavir:6, Lopinavir/ritonavir:4, Atazanavir/ritonavir:3 y Darunavir/ritonavir:2. Se encontraron mutaciones en el 81% de los casos: – Relacionadas con los análogos de nucleótidos 38 casos, 8 de alto nivel de resistencia: 7 M184V, 3 T215Y y sólo una L74V. – En relación con los no-análogos 26 casos, la mitad mutaciones de alto nivel: K103N, 8; Y188C/L, 3; Y181C, 2 y G190E, 2. – En el 74.1% de los casos se describió alguna mutación relacionada con los inhibidores de la proteasa (2 mutaciones de alto nivel: I150L y V82L) y sin embargo, resistencia sólo en el 25%.

En el análisis comparativo de mutaciones, se encontraron diferencias estadísticamente significativas (p<0.05) con los resultados obtenidos en 2004: en M184V/I, T215Y/F y L74V/I para análogos; en K103N, Y181C y G190E para no-análogos y en G48M/V y V82L para inhibidores de la proteasa. No hubo diferencias significativas con los resultados del 2007.

Conclusiones:

– Actualmente existe una alta prevalencia de mutaciones aunque con una menor implicación de resistencias.

– Hubo menor número de mutaciones en el 2007 y mucho mayor en el 2004, con respecto a 2010. Esto puede estar condicionado por poca homogeneidad en las poblaciones estudiadas (sólo pacientes en fracaso múltiple en 2004 y recién diagnosticados en 2007) y estudio de mutaciones más especificas en los últimos años.

– El estudio de resistencia a fármacos antirretrovirales es una herramienta útil en el manejo clínico de todos los  pacientes infectados por VIH.

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Palabras clave: VIH; Resistencias;

Características clínicas y epidemiológicas de los casos de gripe A H1N1 2009 durante la temporada 2009-2010 en el Hospital Virgen de Altagracia de Manzanares (Ciudad Real).

Autores:
Jorge A. Pérez García*. Hospital Virgen De Altagracia. Manzanares. España
Ana Sánchez-Maroto Lozano. Hospital Virgen De Altagracia. Manzanares. España
Soledad Illescas Sánchez-Bermejo. Hospital de Ciudad Real. Ciudad Real. España
Lidia García Agudo. Hospital de Tomelloso. Tomelloso. España

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Objetivos: La OMS alertó a principios del mes de Abril de 2009 de la aparición de un brote  de gripe humana en México, causada por una nueva cepa de gripe A subtipo H1N1. Los primeros casos aparecidos mostraban patrones de comportamiento diferentes a los observados en otros virus de la gripe. Asimismo, el número de casos  complicados  era mayor y no se conocían los factores de riesgo asociados. También era desconocido el papel desempeñado por otros microorganismos en el desarrollo de la enfermedad.    El objetivo de este estudio fue establecer las características clínico-epidemiológicas de los casos de gripe A H1N1 2009 acontecidos en el ámbito de nuestro Hospital, así como  analizar la aparición de coinfecciones bacterianas y  las complicaciones que pudieran ocasionar.

Materiales y Métodos: Desde el mes de Junio de 2009 hasta el mes de Febrero de 2010 se recibieron en el Laboratorio de Microbiología Clínica del Hospital de Manzanares, un  total de 26 muestras clínicas sospechosas de gripe A H1N1 2009.  Las muestras fueron enviadas al laboratorio de referencia (las primeras muestras al Centro Nacional de Microbiología y desde el mes de Octubre al Hospital de Ciudad Real) para ser analizadas por la técnica de referencia, PCR a  tiempo real con transcriptasa inversa (RT-PCR), para el diagnóstico de gripe A H1N1. Para la obtención de  datos clínico-epidemiológicos  se revisaron  las historias clínicas de los pacientes con solicitud de PCR atendidos en nuestro Hospital.

Resultados: 15 (57,69%) muestras fueron positivas para gripe A H1N1 2009 de las 26  analizadas. El mayor pico de incidencia apareció entre las semanas 45 y 49 de 2009. La edad media fue de 30,4 años. El 73,33% de los casos ocurrieron en pacientes comprendidos entre los 16 y 64 años. Dentro de los pacientes PCR positivos,  el 80% presentaba fiebre, tos, malestar general y artromialgias en el momento del diagnóstico. Las comorbilidades más frecuentes que se detectaron fueron el asma y la obesidad (3 casos cada uno, 20 % respectivamente). En este grupo se diagnosticaron  10 (66,66%) neumonías (6 de ellas con un patrón de presentación unilateral y 3 bilateral)  y se ingresaron  14  pacientes, de los que ninguno  necesitó cuidados intensivos. El tiempo de estancia media en el hospital fue de 4,21 días. La mayoría de los pacientes (13; 86,66%) fueron tratados con oseltamivir y ninguno presentó reacciones adversas al medicamento. Por otro lado no se identificó ningún microorganismo causante de coinfección en el momento del diagnóstico.

Conclusiones:

1. La mayor incidencia de enfermedad se produjo en  adultos jóvenes.

2. El asma y la obesidad fueron los factores predisponentes más representativos.

3.  La incidencia de neumonía  entre los pacientes PCR positivos fue elevada.

4.   El tratamiento con oseltamivir resultó eficaz en todos los pacientes que fueron medicados.

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Palabras clave: Gripe A; Neumonía; PCR;

EVALUACIÓN DE UN MÉTODO ABREVIADO DE EXTRACCIÓN PARA LA IDENTIFICACIÓN DE LEVADURAS Y BACILOS GRAM NEGATIVOS MEDIANTE ESPECTROMETRÍA DE MASAS MALDI-TOF

Autores:
MARIA SILLER RUIZ*. HOSPITAL UNIVERSITARIO DE SALAMANCA. SALAMANCA. España
NOELIA CALVO SÁNCHEZ. HOSPITAL UNIVERSITARIO DE SALAMANCA. SALAMANCA. España
MÓNICA DEFRUTOS SERNA. HOSPITAL UNIVERSITARIO DE SALAMANCA. SALAMANCA. España
Mª INMACULADA GARCÍA GARCÍA. HOSPITAL UNIVERSITARIO DE SALAMANCA. SALAMANCA. España
JUAN LUIS MUÑOZ BELLIDO. HOSPITAL UNIVERSITARIO DE SALAMANCA. SALAMANCA. España

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INTRODUCCIÓN. La espectrometría de masas (EM) MALDI-TOF se ha convertido en un método de identificación de referencia en bacteriología y micología, con un nivel defiabilidad, en muchos casos, equiparable a los métodos genéticos. Aunque la metodología más ortodoxa es la extracción de las proteínas con etanol y ácido fórmico, previamente al depósito del extracto en la placa (groundsteel) del espectrómetro y la adición de la matriz, la experiencia muestra que la aplicación de una extensión fina sobre la placa directamente de la colonia, y la adición sobre ella de la matriz, puede dar un resultado satisfactorio, siendo además un método mucho más rápido y sencillo. Sin embargo, en algunos microorganismos, este método da con frecuencia scores insuficientes para una identificación fiable, por lo que hay que recurrir al método de extracción. Recientemente se ha descrito (Haigh et al, J Clin Microbiol 2011, Sep;49(9):3441) un método abreviado de extracción que parece mejorar los scores en estos microorganismos con una metodología mucho más sencilla, similar al método directo. Se ha determinado en un grupo de aislamientos clínicos de levaduras y de bacilos Gram negativos la eficacia de este método, en comparación con el método convencional de aplicación directa.

MATERIAL Y MÉTODOS. Se identificaron 29 aislamientos clínicos de Levaduras y 44 de bacilos Gram negativos por EM MALDI-TOF (Microflex, Bruker Daltonics, Alemania) por aplicación directa, y mediante el método propuesto por Haigh et al.. Dicho método consiste en realizar una aplicación directa sobre la placa del espectrómetro y, una vez seca, añadir 1 ml de ácido fórmico puro. Se deja secar, y se procede a añadir la matriz e identificar del modo habitual.

RESULTADOS. Los resultados obtenidos en levaduras  aparecen en la Tabla 1.

Microorganismo (n)	Mét. Directo (x, intervalo)	Extracción abreviado (x, intervalo)
C. albicans (13)	1,233 (0-1,997)	1,899 (1,736-2,079)
C. glabrata (6)	1, 479 (1,335-1,707)	1,976 (1,760-2,187)
C. tropicalis (2)	1,772 (1,589-1,955)	1,994 (1,952-2,037)
C. krusei (3)	1,265 (0-1,936)	2,246 (2,184-2,289)
C. robusta (2)	1,484 (1,167-1,801)	2,224 ((2,184-2,265)
C. parapsilosis  (2)	1,6 (1,453-1,748)	1,952 (1,931-1,974)
C. guillermondii (1)	1,966	2,241
TOTAL Gen. Candida  (29)	1,543 (0-1,997)	2,076 (1,736-2,289)

 Por el contrario, en Gram negativos no ofreció ventajas significativas. Ha de tenerse en cuenta que, de las 9 especies estudiadas, todas excepto Serratia tuvieron un score medio > 2 ya en el método directo, con lo que el margen de mejora era escaso. Serratia  tuvo unos score medios de 1,862 en el método directo y 1,961 en el abreviado.

DISCUSIÓN. El nuevo método propuesto tiene una rapidez y sencillez similares al método directo, e incrementa sensiblemente los scores obtenidos para la identificación de levaduras. Por el contrario, los scores obtenidos en Gram negativos son similares a los obtenidos por método directo, que en la mayor parte de los casos ya permitían una identificación a nivel de especie con scores plenamente fiables.

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Aislamiento de Candida spp. en el H.C. San Carlos entre los años 2008 y 2010

Autores:
Ana Belén García García. Hospital Clínico San Carlos, Servicio Microbiología Clínica. Madrid. España
Ignacio Bonilla Hernández. Hospital Clínico San Carlos, Servicio Microbiología Clínica. Madrid. España
Iñaki Vallés Díez. Hospital Clínico San Carlos, Servicio Microbiología Clínica. Madrid. España
Paloma Merino Amador. Hospital Clínico San Carlos, Servicio Microbiología Clínica. Madrid. España
Juan José Picazo de la Garza. Hospital Clínico San Carlos, Servicio Microbiología Clínica. Madrid. España

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OBJETIVO: Estudiar la prevalencia de los aislamientos de Candida spp. durante los años 2008, 2009 y 2010 en enfermos hospitalizados y de consultas correspondientes al Hospital Clínico San Carlos y su área. Se ha estudiado además la incidencia en los servicios más representativos del hospital.

MATERIAL Y MÉTODOS: Los aislados procedían de distintas muestras, y fueron procesadas en medios cromogénicos e identificadas por el sistema Vitek®. Se han estudiado un total de 15073 aislados procendentes de pacientes hospitalizados y de consultas.

RESULTADOS: El número de aislamientos de las diferentes especies de Candida  fueron: Pacientes hospitalizados: C. albicans: 4576, C. famata: 63, C. glabrata 893, C. guilliermondii: 9, C. krusei: 221, C. parapsilosis: 587, C. tropicalis: 953, Total: 7302 aislados. Pacientes no hospitalizados: C. albicans: 5384, C. famata: 36, C. glabrata: 663, C. guilliermondii: 39, C. krusei 155, C. parapsilosis: 1158, C. tropicalis: 336, Total: 7771 aislados.

Los porcentajes de especies asiladas en los servicios hospitalarios fueron: C. albicans: UCI 37,25 %, Medicina interna 31 %,  Nefrología 10,9 %, Oncología 9 %, Otros 11,8 %; C. famata: UCI 40,9 %, Medicina interna 15,9 %, Nefrología 11,36 %, Oncología 27,2 %, Otros 4,6 %; C. glabrata: UCI 39,3 %, Medicina interna 23,2 %, Nefrología 16,8 %, Oncología 10,3 %, Otros 10,3 %; C. guilliermondii: Medicina interna 14,28 %, Nefrología 28,6 %, Oncología 42,9 %, Otros 14,2 %; C. krusei: UCI 45,3 %, Medicina interna 15,3 %, Nefrología 7,3 %, Oncología 20,6 %, Otros 11,5 %; C. parapsilosis: UCI 52,9 %, Medicina interna 18 %, Nefrología 9,7 %, Oncología 12,6 %, Otros 6,8 %; C. tropicalis: UCI 39 %, Medicina interna 35,5 %, Nefrología 6 %, Oncología 1 %, Otros 18,5 %. Los porcentajes de especies aisladas en los pacientes procedentes de consultas fueron: C. albicans: Ginecología y Obstetricia 70,8 %, Neumología 9,7 %, ORL 9,7 %, Transplante 4,2 %, Otros 5,6 %, C. famata: Ginecología y Obstetricia 27,2 %, Neumología 9 %, ORL 18,1 %, Transplante 36,3 %; Otros 8,9 %; C. glabrata: Ginecología y Obstetricia 14,2 %, Neumología 10,4 %, ORL 5,4 %, Transplante 61,1 %, Otros 8,9 %; C. gulliermondii: Transplante 83,3 %, Otros 16,7 %, C. krusei: Ginecología y Obstetricia 17,1 %, Neumología 21,9 %,, Transplante 57,8 %, Otros: 3,2 %; C. parapsilosis: Ginecología y Obstetricia 12,5 %, Neumología 11,8 %, ORL 50,7 %, Transplante 20,6 %, Otros 4,4 %; C. tropicalis: Ginecología y Obstetricia 14,51 %, neumología 21 %, ORL 14,51 %, Transplante 33,9 %, Otros: 16 %.

CONCLUSIONES: C. albicans es la especie que se aisló en mayor número en todos los servicios estudiados, tanto en pacientes hospitalizados como en los procedentes de consulta. La especie C. glabrata se aisló en mayor proporción en los servicios de UCI y Medicina interna en pacientes hospitalizados y en las consultas de Transplante y Ginecología y Obstetricia. Las especies C. tropicalis, C. parapsilosis y C. krusei fueron mayoritariamente aisladas en los servicios de UCI y Medicina interna. C. tropicalis y C. krusei se aislaron en mayor número en consulta de transplante y C. parapsilosis en las consultas de ORL. C. guilliermondii fue la especie que se aisló en menor número respecto al total de muestras, sin embargo su incidencia fue mayoritaria en la consulta de transplante.

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Palabras clave: Candida; Aislamiento;